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实时定量pcr步骤_pcr步骤_天天观点
来源: 互联网      时间：2023-05-18 22:15:18

大家好，小评来为大家解答以上问题。实时定量pcr步骤，pcr步骤很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、在冰浴中，按以下顺序将成分加入无菌0.5ml离心管中。

2、10 times PCR buffer


(资料图片)

3、5 microliters of dNTP mixture (2 mm)

4、4微升引物1(10微米)

5、2微升引物2(10微米)

6、2 l Taq enzyme (2U/ l)

7、1 l DNA template (50 ng -1 g/ l)

8、Add ddH2O to 1 microliter to 50 microliter.

9、根据PCR仪器是否有热盖，石蜡油是不加还是加。

10、调整反应程序。稍微离心混合溶液，并立即将其放在PCR仪器上进行扩增。一般在93预变性3-5min，进入循环扩增阶段：9340s5830s7260s，30-35个循环。

11、最后，在72保温7min。

12、反应结束后，将PCR产物置于4下进行电泳检测或在-20下长期保存。

13、PCR的电泳检测：若反应管中加入石蜡油，应使用100l氯仿萃取反应混合物以去除石蜡油；否则，直接取5-10l进行电泳检测。

本文到此结束，希望对大家有所帮助。

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